六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影響

眼科新進展 2016年4月 第36卷 第四期334-335頁 《六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和ND3含量的影響》

中國科技論文統(tǒng)計源期刊（中國科技核心期刊）

 

六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影響

 

[摘要]目的：探討六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和神經營養(yǎng)素-3（NT-3）的影響。方法：采用光感受器間維生素A類結合蛋白（IRBP1177-1191）制備葡萄膜炎大鼠模型，造模第2天開始給藥，第13天心臟取血，采用ELISA檢測六銳膠囊對EAU大鼠抗氧化作用SOD、MDA的表達變化和視神經保護作用NT-3的表達變化。結果：六銳膠囊不同劑量組、模型對照組的SOD和NT-3水平低于對照組，六銳膠囊不同劑量組的SOD 和NT-3水平高于模型組，且隨六銳膠囊劑量的增加，SOD和NT-3水平增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。六銳膠囊不同劑量組、模型對照組的MDA水平高于對照組，六銳膠囊不同劑量組的MDA水平低于模型組，且隨六銳膠囊劑量的增加，MDA水平上升，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：六銳膠囊可增加葡萄膜炎大鼠血清SOD 和NT-3水平，降低血清MDA水平，具有抗氧化和視神經保護作用。

[關鍵詞]六銳膠囊，葡萄膜炎，血清，超氧化物歧化酶，丙二醛，神經營養(yǎng)素-3

葡萄膜炎是眼科常見的、反復發(fā)作的嚴重致盲性眼病，發(fā)病率高危害性大，在病理上存在葡萄膜、視網膜、視網膜血管及玻璃體的炎癥。在我國大約有400萬同胞罹患此病，并且具有持續(xù)上升的趨勢[1-2]。葡萄膜炎的一個顯著特點是炎癥反應常呈慢性、復發(fā)性，因此在治療上相當棘手[3]。目前，西醫(yī)主要靠長期大劑量糖皮質激素及免疫抑制劑治療，易導致許多全身或眼部的嚴重并發(fā)癥。中醫(yī)藥治療葡萄膜炎具有明顯的優(yōu)勢，尤其對西藥治療無效的葡萄膜炎患者更具優(yōu)勢[4]。六銳膠囊主要由六種藏藥藥物組成，訶子、紅花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香。六銳膠囊目前已經應用在臨床并已取得了一定的療效，主要用于血、膽、疬引起的頭痛病，云翳等眼科疾病，旨在清熱涼血，明目退翳[5-6]。本研究光感受器間維生素A類結合蛋白（IRBP1177-1191）制備葡萄膜炎大鼠為模型，探討六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）和神經營養(yǎng)素-3（neurotrophin-3，NT-3）的影響。

1  材料與方法

1.1  實驗材料  6~8周雌性Lewis大鼠，體重160~180g，由北京維通利華實驗動物有限公司提供（動物許可證號：SCXK（京）2006-0009）；六銳膠囊（西安大唐制藥集團有限公司提供國藥準字：Z20090461）；IRBP（1177-1911，氨基酸序列：ADGSSWEGVGVVPDV）購于上海生工生物工程股份有限公司合成；完全弗氏佐劑（Complete Freund’s adjuvant, CFA）購于美國sigma公司；結核分枝桿菌H37RA（mycobacteriumTuberculosis, TB）美國Difco公司。SOD、MDA和NT-3試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。Biotek Elx800酶標儀（美國Bio-Tek儀器公司），所有實驗均符合ARVO對于動物在眼睛和視覺方面應用的要求。

1.2模型制備  將40Leweis只雌性大鼠，隨機分為5組，每組各8只，分為空白對照組，模型對照組和六銳膠囊低中高劑量組5組。進行1周適應飼養(yǎng)后模型對照組和六銳膠囊低中高劑量組4組，在大鼠腹腔內注射10％水合氯醛注射液（0.5ml/100g）進行全身麻醉，皮下注射300μl含有100μgIRBP1177-1191,150μl完全弗氏佐劑，100μg TB及150μl PBS的乳化液，在兩足墊處、尾根部兩側及脊背正中均勻注射5點[7]。

1.3給藥方式與方法  免疫后第2天開始用藥，空白對照組和模型對照組給予2mL的生理鹽水，六銳膠囊低中高劑量組分別給予含0.4g、0.8g和1.2g六銳膠囊的2mL藥液。連續(xù)灌胃給藥12天。

1.4指標檢測 于免疫后第13天心臟取血4mL，3000 r/min的速度離心15 min，分離血清，-80℃保存待測。參照SOD、MDA和NT-3試劑盒說明書，采用用酶聯(lián)免疫吸附法在450nm處測OD值，計算其濃度。

1.5統(tǒng)計分析  采用SPSS19.0進行統(tǒng)計數據分析，計量資料以（±S）表示，采用t檢驗比較組內和組間差異，P<0.05為具有統(tǒng)計學意義的檢驗標準。

2結果

2.1各組大鼠血清SOD的比較  空白對照組大鼠血清SOD含量水平最高，模型對照組血清SOD含量水平最低，隨六銳膠囊劑量的增加，血清SOD含量增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

表1葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3比較（±S）

組別	只數	SOD（U/mL）	MDA（nmol/mL）	NT-3（μg/mL）
空白對照組	8	180.12±12.36	3.62±0.13	103.25±14.82
模型對照組	8	119.37±8.91●	10.81±1.03●	63.58±7.61●
六銳膠囊低劑量組	8	136.52±9.78●△	9.18±0.76●△	79.35±8.61●△
六銳膠囊中劑量組	8	153.27±10.67●△★	7.21±0.56●△★	86.91±9.13●△★
六銳膠囊高劑量組	7	168.79±11.36●△★■	4.83±0.27●△★■	97.28±11.29●△★■

注：與空白對照組比較，●P＜0.05；與模型對照組比較，△P＜0.05；與六銳膠囊低劑量組比較，★P＜0.05；與六銳膠囊中劑量組比較，■P＜0.05。

2.2各組大鼠血清MDA的比較  空白對照組大鼠血清MDA含量水平最低，模型對照組血清MDA含量水平最高，隨六銳膠囊劑量的增加，血清MDA含量降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

2.3各組大鼠血清NT-3的比較  空白對照組大鼠血清NT-3含量水平最高，模型對照組血清NT-3含量水平最低，隨六銳膠囊劑量的增加，血清NT-3含量增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

3討論

葡萄膜炎病因不清，感染、外傷等多種因素均可引起葡萄膜炎，近來認為自身免疫紊亂可能參與了疾病誘導。目前葡萄膜炎尚無理想治療方法，其治療主要是非甾體消炎藥和糖皮質激素等免疫抑制劑，往往常會導致許多嚴重的并發(fā)癥。祖國醫(yī)學將葡萄膜炎稱為“瞳神緊小”。其發(fā)病機理是：肝膽火熾、熱毒亢盛、火邪燔灼循經上傳、上犯于目或挾風、熱、痰、濕所致[8]。用中藥從整體水平進行調理，使機體重新達到陰陽平衡，具有良好的治療作用[9]。六銳膠囊主要由六種藏藥藥物組成，訶子、紅花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香。六銳膠囊目前已經應用在臨床并已取得了一定的療效，主要用于血、膽、疬引起的頭痛病，云翳等眼科疾病，旨在清熱涼血，明目退翳。現代藥理學研究證明[10-11]，六銳膠囊中的有效成分沒食子酸具有抗氧化、抗病毒和抗血小板聚集等作用，藏紅花提取液是經自由基與超氧自由基的強效清除劑，能夠抗氧化反應，改善線粒體功能，抑制視神經細胞凋亡。結合六銳膠囊的臨床應用，我們推測六銳膠囊具有抗氧化和視神經保護作用。因此，本研究探討六銳膠囊對葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影響，為臨床治療提供依據。

氧化應激是葡萄膜炎發(fā)病的機制之一，氧化應激是指機體在遭受各種有害刺激時，體內活性分子生成過多，造成體內清除氧化物不及時，從而導致細胞和組織損傷的生理和病理反應。SOD是機體清除氧自由基的主要酶類，其活性高低可以反映組織清除氧自由基的能力。MDA是脂質代謝產物，MDA含量可以反映出組織中氧自由基含量的變化以及氧自由基引起脂質過氧化程度，從而判斷疾病損傷程度[12]。NT-3主要存在于中樞神經系統(tǒng)膠質細胞和神經元，具有支持神經兒存活、調節(jié)和維持神經兒突觸功能，促進損傷神經的再生和修復等作，對多種神經元均有重要作用[13]。本研究發(fā)現，隨六銳膠囊劑量的增加，血清SOD含量增加，血清MDA含量降低，血清NT-3含量增加，差異有統(tǒng)計學意義。說明六銳膠囊可以增加葡萄膜炎大鼠血清SOD的含量，降低MDA的含量及增加NT-3含量。方中訶子降火、下氣功效，紅花活血通經、散疲止痛，巴夏嘎清熱愈瘡、生肌止血、活血明目之功效，木香及安息香的補氣止痛、促運氣血、調中導滯之功效相關[14]?，F代藥理研究表明，六銳膠囊可顯著改善血液粘稠度，促進毛細血管通透性恢復正常，增強毛細血管杭炎作用。六銳膠囊可增強機體的抗氧化能力，調節(jié)機體的免疫狀態(tài)，促進葡萄膜炎癥的消退，提高患者的視功能密切相關[15]。

綜上所述，六銳膠囊可增加葡萄膜炎大鼠血清中SOD和NT-3的含量，降低血清MDA的含量，具有抗氧化和保護視神經的功效。

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